Práctica 17: Contaje de reticululocitos. (PXVI)(B1)

Fecha: 27-11-14

Contaje de reticulocitos. (PXVI).

Introducción:

Los reticulocitos son los eritrocitos sin madurar y como su nombre indica, contienen un reticulo o red de cromatina formada por restos de ARN, mitocrondrias y otros orgánulos celulares.

Tienen un tamaño de 8 a 9 micrometros de diametro. Permanecen en la médula ósea unos 2 o 4 días y despúes salen a la sangre periférica, donde terminan el proceso de maduración en unas 24 horas.

Su cantidad en sangre periférica es un reflejo de la actividad eritropoyética medular.

Material:

-Microscopio.

-Tubos de hemolisis.

-Pipetas pasteur.

-Portaobjetos.

-Baño de agua.

-Sistema de filtración.

Reactivos:

-Azul de cresil brillante en polvo.

-Solución salina al 0,9%.

-Citrato sódico al 3%.

-Agua destilada.

-Aceite de inmersión.

Muestra:

Sangre anticoagulada con EDTA.

Fundamento:

-Mediante esta tinción, podemos observar los reticulocitos a microscopio, este colorante puede dar lugar a precipitados de los restos de ARN y se observarán como filamentos de color azul intenso en el interior de la célula.

-Según el grado de maduración, presentará un modelo de reticulocito diferente.

Procedimiento:

1. Preparación del colorante:

-Mezclar 80ml de solución salina y 20ml de citrato sódico al 3%(Si en 100ml hay 3g de citrato sódico, en 20ml hay X, X=0.6g de citrato sódico).

-Pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior.

-Se filtra antes de usarse.

2. Echamos tres gotas de solución colorante en un tubo de hemólisis y otras tres gotas de sangre, mezclamos suavemente y cerramos con papel parafilm.

3. Introducimos en el baño de agia a 37ºC durante cinco minutos.

4. Pasado ese tiempo sacamos el tubo y con la ayuda de una pipeta pasteur, realizamos un frotis en un portaobjetos y dejamos secar.

5. Colocar una gota de aceite de inmersión y enfocar con el objetivo de 100x.

Interpretación de los resultados:

Los hematies estan teñidos de color verde amarillento y los reticulocitos se diferencian porque presentan en su interior hilos finos de color azul.