Tinción supravital con azul de metileno. (PV).
Introducción:
Al investigar las estructuras celulares podemos utilizar dos formas diferentes de tinción: aquellas que se hacen con el tejido muerto y las que utilizan tejido o células vivas para su observación.
Entre las segundas podemos diferenciar las tinciones vitales, que consisten en la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo y las tinciones supravitales, que emplean el colorante sobre células o tejidos vivos aislados del organismo.
En ambos casos loq ue se pretende es destacar los elementos de la célula viva y seguir los procesos vitales en el interior de la misma.
Los colorantes vitales más utilizados son el rojo neutro, que tiñe fundamentalmente los gránulos citoplasmáticos, el verde jano, que tiñe mitocondrias y otros organulos celulares, y el azul de metileno, que tiñe núcleos y algunas estructuras celulares.
Material:
-Microscopio optico.
-Un portaobjetos y un cubreobjetos.
-Tubos de hemólisis.
-Pipetas pasteur.
-Parafilm.
-Sangre capilar o venosa.
-Lanceta.
-Alcohol.
-Gasas.
Muestra:
-Sangre capilar o sangre venosa anticoagulada.
Reactivos:
-Azul de metileno preparado.
-Oxalato potásico.
Fundamento:
En esta tinción supravital utilizaremos como colorante el azul de metileno nuevo. Este es de carácter básico y tiñe fundamentalmente los núcleos celulares.
Procedimiento:
1. Preparar colorante: Pesar 0.5g de azul de metileno nuevo y 1,6g de oxalato potásico y mezclarlos en 100ml de agua destilada c.s.p (cantidad suficiente para).
2. En un tubo de hemólisis depositamos dos gotas de sangre y otras dos gotas de colorante.
3.Tapar el tubo de hemólisis con parafilm y dejar reposar durante diez minutos.
4.Con la ayuda de una pipeta pasteur, depositamos una gota de la muestra teñida en un portaobjetos y cubrimos con un cubreobjetos.
5.Observamos la preparación resultante al microscopio óptico con el objetivo de 40x.
Interpretación de los resultados:
- La observación a microscopio debe ser rápida, ya que las células no permanecen vivas mucho tiempo, se puede apreciar los núcleos celulares teñidos, pero mi grupo al no esperarnos el tiempo necesario para la fijacion de colorante a las células, se veía poca cosa.
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